德晟告诉您如何制作TAE缓冲区
TAE缓冲液是由Tris碱乙酸和EDTA(Tris-acetate-EDTA)组成的溶液它是用分析PCR扩增DNA纯化方案或DNA克隆实验产生的DNA产物的琼脂糖凝胶电泳最常用的缓冲液
该缓冲剂具有低离子强度和低缓冲能力它最适合大型(> 20千碱基)DNA的电泳需要经常更换或循环使用更长的时间(> 4小时)考虑到这一点就要考虑制作多个批次的缓冲区
鉴于缓冲区易于制造且步骤易于快速执行因此一次生产多个批次会效率更高按照以下说明只需30分钟即可制作TAE缓冲区
TAE缓冲区需要准备什么
由于制作TAE缓冲区仅需要快速简单的指令因此所需的材料数量并不太多只需要EDTA(乙二胺四乙酸)二钠盐Tris碱和冰醋酸
制备缓冲液还需要适当的pH计和校准标准需要600毫升和1500毫升的烧杯或烧瓶量筒离子水搅拌棒和搅拌盘
特别说明公式重量(每个元素的原子质量乘以原子数然后将每个原子的质量相加)缩写为FW
提前准备EDTA将pH值调节到8.0否则EDTA不会完全溶解对于0.5毫升(摩尔或浓度)EDTA的500毫升储备溶液称出93.05克EDTA二钠盐(FW = 372.2)将其溶于400毫升去离子水中并用氢氧化钠(NaOH)调节pH值加满溶液至最终体积为500毫升
库存解决方案
①称量242克Tris碱(FW = 121.14)并将其溶解在大约750毫升的去离子水中制成TAE的浓缩(50x)储备液小心加入57.1毫升冰酸和100毫升0.5 M EDTA(pH 8.0)
②将溶液调整至最终体积为1升该储备溶液可以在室温下保存此缓冲液pH值应约为8.5
③准备TAE缓冲液的工作溶液通过在去离子水中简单地将储备溶液稀释50倍即可制成1倍TAE缓冲液的工作溶液最终溶质浓度为40 mM(毫摩尔)三乙酸盐和1 mM EDTA现在可以使用该缓冲液运行琼脂糖凝胶了
在开始确定库存之前请先检查库存以确保上述用于TAE缓冲器的所有材料供应人员可以提前列出所有物品